Tài liệu Luận văn:Nghiên cứu chiết tách, chuyển hóa hydroxycitric acid trong lá, vỏ quả bứa và ứng dụng tạo sản phẩm giảm béo docx




1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG


ĐẶNG QUANG VINH


NGHIÊN CỨU
CHIẾT TÁCH, CHUYỂN HOÁ
HYDROXYCITRIC ACID TRONG LÁ,
VỎ QUẢ BỨA VÀ ỨNG DỤNG TẠO SẢN PHẨM GIẢM BÉO

Chuyên ngành: HOÁ HỮU CƠ
Mã số: 62 44 27 01


TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SĨ HOÁ HỌC



Đà Nẵng – Năm 2012




2

Công trình ñược hoàn thành tại
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG


Người hướng dẫn khoa học:
1. GS. TS. ĐÀO HÙNG CƯỜNG
2. PGS.TS. NGUYỄN THƯỞNG



Phản biện 1: PGS.TS.Trần Văn Thắng
Phản biện 2: PGS.TS. Lê Tự Hải
Phản biện 3: PGS.TS. Nguyễn Thị Thu Lan


Luận án sẽ ñược bảo vệ tại Hội ñồng chấm Luận án
tiến sỹ chuyên ngành Hóa hữu cơ họp tại Đại học Đà
Nẵng vào ngày 20 tháng 7 năm 2012.




Có thể tìm hiểu luận văn tại:
- Trung tâm Thông tin - H
ọc liệu, Đại học Đà Nẵng
-
Thư viện trường Đại học Sư phạm, Đại học Đà Nẵng




3

MỞ ĐẦU
1. Tính cấp thiết của ñề tài
Trên thế giới việc nghiên cứu cây bứa ñã ñược chú trọng từ lâu,
tính ñến nay ñã có hàng trăm công trình nghiên cứu về cây bứa bao
gồm các lĩnh vực chiết tách, xác ñịnh thành phần hoá học các hợp
chất hữu cơ, ứng dụng trong công nghệ thực phẩm, công nghệ dược
phẩm, ñặc biệt là các loại chế phẩm giảm béo. Tuy nhiên, chưa có
công trình nào công bố về nghiên cứu chuyển hoá HCA và ứng dụng
giảm béo một cách chi tiết.
Cây bứa là một loại cây rất dễ trồng, phát triển tốt, cho năng suất
cao có ở hầu hết trên các ñịa bàn Miền Trung, Tây Nguyên. Người
Việt Nam ta dùng lá và quả bứa làm món ăn, dùng vỏ quả bứa ñể trị
một số bệnh ngoài da và dùng búp non nhai ăn ñể chữa bệnh ñộng
thai Cho ñến nay ở nước ta chưa có một nghiên cứu nào mang tính
cơ bản về thành phần, tính chất, khả năng chuyển hoá và ứng dụng,
công nghệ khai thác về các hợp chất hoá học có trong cây bứa. Đây
là những vấn ñề rất ñáng ñược quan tâm nghiên cứu nhằm góp phần
quy hoạch, khai thác, chế biến và ứng dụng các sản phẩm của cây
bứa một cách có hiệu quả, khoa học hơn.
Với những lí do trên, chúng tôi chọn ñề tài nghiên cứu: "Nghiên
cứu chiết tách, chuyển hoá hydroxycitric acid trong vỏ quả bứa và
ứng dụng tạo sản phẩm giảm béo" làm luận án tiến sĩ chuyên ngành
hóa hữu cơ của mình.
2. Mục ñích nghiên cứu
- Xác ñịnh hàm lượng, tính chất, khả năng chuyển hoá của
hydroxycitric acid trong lá và vỏ quả bứa.
- T
ạo ra chế phẩm phụ gia thực phẩm khảo nghiệm giảm béo.
- Đóng góp thêm những thông tin, tư liệu khoa học về cây bứa.



4

3. Đối tượng và phạm vị nghiên cứu
* Đối tượng nghiên cứu:
- Lá, vỏ quả của cây bứa tại xã Hòa Liên, h. Hòa Vang, TP. ĐN.
* Phạm vi nghiên cứu:
- Nghiên cứu chiết tách bằng dung môi nước và dung môi hữu
cơ, ñịnh tính và ñịnh lượng các acid có trong trong lá, vỏ quả bứa.
- Tinh chế, phân tích các chỉ tiêu mẫu thí nghiệm, sản phẩm.
- Phản ứng chuyển hoá HCA thành các muối kim loại nhóm I và
II (K, Ca).
- Đánh giá khả năng hoạt tính sinh học của các sản phẩm sau
chuyển hoá.
4. Phương pháp nghiên cứu
Nghiên cứu lý thuyết kết hợp với thực nghiệm.
5. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của ñề tài
Định danh tên khoa học cây bứa vùng nguyên liệu, xác ñịnh acid
hữu cơ trong lá, vỏ quả bứa. Chuyển hóa HCA trong lá, vỏ quả bứa
thành các dạng muối bền và có hoạt tính sinh học. Cung cấp các
thông tin về khả năng chống béo phì các chế phẩm chuyển hóa. Cập
nhật các thông tin về lá, vỏ quả bứa và hợp chất HCA. Tạo cơ sở ban
ñầu ñể nghiên cứu chiết tách, chuyển hóa HCA từ cây bứa Việt Nam
với quy mô công nghiệp ñể sản xuất thực phẩm chức năng giảm cân,
thúc ñẩy sự phát triển của ngành dược liệu trong nước.
6. Cấu trúc của luận án
Luận án gồm phần mở ñầu, kết luận và kiến nghị, các công trình
ñã công bố, tài liệu tham khảo, phụ lục và 03 chương.

CH
ƯƠNG 1 - TỔNG QUAN
1.1. MỘT SỐ LOÀI BỨA TẠI VIỆT NAM VÀ THẾ GIỚI



5

1.1.1. Đặc ñiểm, phân bố cây bứa
Ở nước ta còn có một số loài
bứa như: Bứa - Garcinia
oblongifolia Champ. Ex Benth (hình
1.1); Bứa mọi - Garcinia harmandii
Pierre; Bứa nhà - Garcinia
cochinchinensis (Lour) Choisy; Tai
chua - Garcinia pedunculata Roxb
(G. cowa Roxb); Bứa ñồng - Garcinia schomburgkiana Pierre; Bứa
lửa - Garcinaia fusca Pierre; Bứa Scheffer - Garcinaia schefferi
Pierre; Bứa Planchon - Garcinaia planchonii Pierre; Bứa mủ vàng -
Garcinia xanthochymus Hook.f.ex J. Anderson. Một số loại bứa khác
ở Ấn Độ như: Garcinia cambogia; Garcinia indica; Garcinia
atroViridis.
1.2. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU HYDROXYCITRIC ACID
(HCA), CÁC MUỐI CỦA HCA TRONG NƯỚC VÀ THẾ GIỚI
1.2.1. Kết quả nghiên cứu trên thế giới
1.2.1.1. Nguồn gốc (-)-HCA
(-)-HCA ñược tìm thấy trong vỏ quả của một vài loài bứa, bao
gồm tai chua (G. cowa), G. cambogia, G. indica, và G. atroViridis.
Các loài này mọc nhiều tại lục ñịa Ấn ñộ và phía tây Sri Lanka.
1.2.1.2. Hoá học của (-)-HCA
Sự khám phá (-)-HCA: Kurian và Pandiya (1931);
Screenivasan và Venkataraman (1959) nhầm lẫn cho rằng acid trong
quả G. cambogia là tartaric acid và citric acid. Lewis và cộng sự
(1964)
ñã xác ñịnh chính xác acid trong quả G. cambogia là di-
hydroxy tri-cacboxylic acid hay hydroxycitric acid.

Hình 1.1. Quả, lá, hoa của bứa





6

COOH
C H
HO
COOH
HO
C
COOHCH
H
(-)-hydroxycitric acid (I) (+)-hydroxycitric acid (II)
COOH
C
H
C
COOHCH
H
HOOC
OH
OH
COOH
C H
HO
C
COOHCH
H
(+)-allo-hydroxycitric acid (III) (-)-allo-hydroxycitric acid (IV)
COOH
C
H
C
COOHCH
H
OH
HOOC
OH COOH
HO

Hình 1.8. Cấu trúc ñồng phân của hydroxycitric acid
Chiết tách: Lewis và Neelakantan (1965) ñã chiết tách (-)-HCA
từ vỏ quả G. cambogia khô sử dụng phương pháp chưng ninh trong
nồi áp suất (10 psi (lb/in.
2
) trong thời gian 15 phút với dung môi
nước. Moffett và cộng sự (1996) phát triển chiết tách (-)-HCA bằng
nước, dịch chiết cho qua cột trao ñổi anion ñể hấp thụ (-)- HCA, và
nó ñược rửa với natri/kali hiñroxit ñể thu (-)-HCA. Bhabani S. Jena
và cộng sự (2002) ñã tiến hành chiết acid trong vỏ quả G. cowa bằng
phương pháp chiết soxhlet với dung môi axeton hoặc metanol.
Nhận xét: Các phương pháp chiết tách ñược công bố trên
nguyên tắc và rất chung, chưa có nghiên cứu chi tiết quá trình chiết
tách theo thời gian, tỷ lệ dung môi (R/L), hoặc các ñiều kiện chiết
tách khác. Về phương pháp chiết tách dùng hai phương pháp chính
gồm: Phương pháp chiết chưng ninh trong nồi áp suất với dung môi
nước và phương pháp chiết soxhlet với dung môi hữu cơ là axeton,
metanol.
Hoá học lập thể: HCA có 02 trung tâm bất ñối; vì vậy, có thể
tồn tại 02 cặp ñồng phân lập thể hoặc 04 ñồng phân khác nhau (Hình
1.8). Martius và Maue
ñã tổng hợp thành công 04 ñồng phân lập thể
của hydroxycitrate. Glusker và cộng sự ñã báo cáo cấu trúc và cấu
hình chính xác của canxi hydroxycitrate và (-)-HCA lacton bằng



7

chụp X-quang tinh thể. Stallings và cộng sự báo cáo cấu trúc tinh thể
muối etylen di amin cặp ñồng phân lập thể hydroxycitrate.
Tính chất của (-)-HCA và lacton: Đương lượng của lacton sạch
là 69, xác ñịnh bằng chuẩn ñộ kiềm hoặc phân tích bằng muối bạc.
Cấu trúc của (-)-HCA lacton ñã ñược chứng minh bằng phổ IR và
1
H-NMR. (-)- HCA lacton thể hiện rõ dải sóng phổ IR tại 3200,
1760, và 1680 cm
-1
. Quang phổ
1
H-NMR của (-)-HCA lacton cho
thấy 02 proton tại γ-cacbon, nó cho AB quartet tại δ 2,53 và δ 2,74
với J = 17,1Hz, và 01 proton tại α-cacbon cho thấy một singlet tại δ
5,15.
Định lượng (-)-HCA: Lowenstein và Brunengraber (1981) ñã
xác ñịnh lượng hydroxycitrate chứa trong quả G. cambogia bằng
phương pháp sắt ký khí. Jayaprakasha và Sakariah (1998, 2000,
2002) ñã phát triển HPLC ñể xác ñịnh acid hữu cơ trong quả của G.
cambogia, mẫu chiết thương mại của G. cambogia, và lá, vỏ quả của
G. indica.
1.2.1.3. Các muối kim loại của (-)-HCA
1.2.1.3.1. Các loại muối kim loại của (-)-HCA
Ibnusaud và cộng sự ñã tạo muối natri hydroxycitrate bằng cách
cho dịch chiết vỏ quả G. cambogia tác dụng với NaOH ở 80
0
C.
Singh và cộng sự ñiều chế muối canxi của (-)-HCA. Ganga Raju ñã
ñiều chế muối canxi và kali của (-)-HCA hay muối hai kim loại natri
của (-)-HCA và hiệu quả của nó như là những chất bổ sung ăn kiêng
và những sản phẩm thức ăn ñể giảm cân nặng.
1.2.1.3.2. Nghiên cứu tạo muối kali hydroxycitrate
Majeed và c
ộng sự chỉ ra một cách thức mới ñể ñiều chế muối
HCK bền vững và có hoạt tính sinh học.
1.2.1.3.4. Nghiên cứu tạo muối canxi hydroxycitrate



8

Bhaskaran và Mehta ñã công bố phương pháp hình thành muối
canxi và kali của HCA và hỗn hợp của chúng.
1.2.1.3.5. Một số nghiên cứu tạo muối kim loại của (-)-HCA khác
Balasubramanyam và cộng sự ñưa ra phương pháp tạo thành cặp
muối kim loại hòa tan nhóm IA và IIA của (-)-HCA. Gokaraju và
cộng sự công bố dạng muối hai kim loại của (-)-HCA với các kim
loại nhóm II. Gokaraju và cộng sự cũng công bố công thức của muối
ba kim loại của (-)-HCA. Samuel và cộng sự ñã nghiên cứu các muối
phức tạp ba, bốn và năm kim loại của (-)-HCA, thành phần cấu tạo
và những phương pháp tổng hợp chúng, với các muối chứa ít nhất 3
kim loại khác nhau ñược lựa chọn từ kẽm, magie, natri, kali và canxi.
Nhận xét: Các tài liệu chuyển hoá ñã công bố ñưa ra quy trình
rất chung (quy trình nguyên tắt) mà chưa ñưa ra các ñiều kiện phản
ứng một cách chi tiết.
1.2.1.4. Hoá sinh của (-)-HCA
Sự ức chế của enzyme chia tách muối citrate bởi (-)-HCA.
Enzyme chia tách citrate, là ATP citrate lyase (ATP citrate
oxaloaxetat lyase), xúc tác việc chia tách ngoại ty thể của citrate
thành oxaloaxetat và axetyl-CoA. Watson và cộng sự ñã tìm thấy sự
ức chế mạnh mẽ của ATP citrate oxaloaxetat lyase bởi (-)-HCA là
enzyme tinh chế từ gan chuột. Cheema – Dhadli tìm thấy sự chế của
enzyme này ở cả (-)-HCA tự do (Ki = 8 µM) và lacton của (-)-HCA
(Ki = 50 – 100 µM). Sullivan và cộng sự và Stallings và các cộng sự
ñã quan sát thấy trong 4 ñồng phân của HCA thì (-)-HCA là chất gây
ức chế tiềm năng duy nhất của ATP citrate lyase.
1.2.1.5. Tác d
ụng của (-)-HCA và muối kim loại của nó
Clouatre và cộng sự khẳng ñịnh các muối Ca, Mg, K hoặc Na
của (-)-HCA có hiệu quả trong việc tăng sự chuyển hóa glucose



9

trong cơ thể, giảm nồng ñộ ñường cao trong máu của bệnh nhân bệnh
tiểu ñường. Gokaraju và cộng sự mô tả việc sử dụng muối canxi,
kẽm của (-)-HCA như là nguồn bổ sung dinh dưỡng ăn uống.
Shrivastava và cộng sự mô tả dược tính của muối Mg của (-)-HCA
trong ñiều trị bệnh.
Nhận xét: Trên ñây có nhiều công trình công bố, nhưng chưa có
công trình nào công bố một cách chi tiết về các tác dụng của các dẫn
xuất của HCA trên ñộng vật. Và cũng chưa có công trình nào nghiên
cứu ứng dụng trực tiếp HCA trong tự nhiên mà không cần phải
chuyển hoá.
1.2.2. Kết quả nghiên cứu trong nước
Ở nước ta có một số công trình nghiên cứu về chiết tách xanthon
và các dẫn xuất phenol từ một số loài bứa: bứa Delpy; vỏ cây bứa
cọng (Garcinia pedunculata); bứa núi; vỏ bứa Lanessan, Nguyễn
Đình Hiệp ñã nghiên cứu Benzophenon có khả năng ức chế các tế
bào ung thư từ vỏ trái bứa nam (Garcinia cochinchinense). Năm
2004, Đỗ Thị Tuyên và các cộng sự ñã nghiên cứu ảnh hưởng của
cao chiết từ quả bứa (Garcinia cambogia) lên các enzyme chống oxy
hoá ở gan chuột bị nhiễm ñộc CCl
4
mãn tính. Tuy nhiên, chưa có
công trình nào nghiên cứu các acid hữu cơ từ cây bứa cũng như ứng
dụng của nó.
1.2.3. Nhận xét chung
Trên thế giới việc nghiên cứu cây bứa ñã ñược chú trọng từ lâu,
tính ñến nay ñã có hàng trăm công trình nghiên cứu về cây bứa bao
gồm các lĩnh vực chiết tách, xác ñịnh thành phần hoá học các hợp
ch
ất hữu cơ, ứng dụng trong công nghệ thực phẩm, công nghệ dược
phẩm, ñặc biệt là các loại chế phẩm giảm béo. Tuy nhiên, chưa có
công trình nào công bố về nghiên cứu chuyển hoá HCA một cách chi



10

tiết.
Cho ñến nay ở nước ta chưa có một nghiên cứu nào mang tính cơ
bản về thành phần, tính chất, khả năng chuyển hoá và ứng dụng,
công nghệ khai thác về các hợp chất hoá học có trong cây bứa. Đây
là những vấn ñề rất ñáng ñược quan tâm nghiên cứu nhằm góp phần
quy hoạch, khai thác, chế biến và ứng dụng các sản phẩm của cây
bứa một cách có hiệu quả, khoa học hơn.


CHƯƠNG 2 - NGUYÊN LIỆU
VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1. NGUYÊN LIỆU
Lá, quả Bứa ñược hái từ xã Hoà Liên – h. Hoà Vang – TP. ĐN.
2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1. Phương pháp vật lý
Nguyên liệu ñược kiểm tra ñộ ẩm, hàm lượng tro bằng phương
pháp trọng lượng.
Các chế phẩm HCCa, HCK sau chuyển hoá ñược kiểm tra bằng:
phổ hồng ngoại (IR); sắc ký lỏng cao áp; quang phổ hấp thụ nguyên
tử; cộng hưởng từ hạt nhân; ño ñộ quay cực; phổ khối lượng.
2.2.2. Phương pháp hoá lý
Sử dụng 03 phương pháp chiết tách ñể chiết tách HCA từ lá, vỏ
quả bứa gồm: chiết chưng ninh trong nồi áp suất; chiết soxlet và
chiết bằng năng lượng vi sóng. Tổng lượng acid trong dịch chiết
ñược xác ñịnh bằng phương pháp chuẩn ñộ. Dùng phương pháp
chuy
ển hoá ñể tạo muối kali và canxi của (-)-HCA chiết tách từ lá,
vỏ quả bứa.



11

2.2.3. Phương pháp sinh học
Các chế phẩm HCCa, HCK sau chuyển hoá ñược ñánh giá khả
năng chống béo phì bằng phương pháp thử tác dụng dược lý của chế
phẩm trên chuột và ñược kiểm tra vi sinh vật bằng phương pháp phân
tích vi sinh vật.

CHƯƠNG 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KHẢO SÁT NGUYÊN LIỆU BỨA
3.1.1. Định danh cây bứa vùng nguyên liệu
Kết quả ñịnh danh cây bứa tại x.Hoà Liên-h.Hoà Vang-TP. ĐN:
Tên khoa học: Garcinia oblongifolia Champ. Ex Benth. Tên latin
khác: G. bonii Pitard. Họ: Clusiaceae (Guttiferae) - Bứa.
3.1.2. Xử lý nguyên liệu
Nguyên liệu gồm lá, quả bứa ñược thu hái tại x.Hoà Liên-h.Hoà
Vang-TP. ĐN ñược rửa sạch, loại bỏ lá, quả hư hỏng ñể chuẩn bị cho
các thí nghiệm.
3.1.3. Xác ñịnh ñộ ẩm, hàm lượng tro và kim loại có trong
nguyên liệu lá, vỏ quả bứa
3.1.3.1. Xác ñịnh ñộ ẩm
Độ ẩm trong lá bứa tươi trung bình là 70,90 %. Đổ ẩm trong vỏ
quả bứa trung bình là 84,34 %.
3.1.3.2. Xác ñịnh hàm lượng tro
Hàm lượng tro trong lá bứa sấy khô trung bình là 3,44 %. Hàm
lượng tro trong vỏ quả bứa khô trung bình là 1,42 %.
3.1.3.3. Xác ñịnh thành phần kim loại nặng
K
ết quả phân tích thành phần kim loại nặng trong lá, vỏ quả bứa
cho thấy các chỉ tiêu kim loại nặng ñạt tiêu chuẩn vệ sinh ñối với
lương thực và thực phẩm của Việt Nam và thế giới.



12

3.1.4. Khảo sát sự phụ thuộc của tổng lượng acid, HCA, CA thu
ñược theo ñộ tuổi quả bứa
Kết quả khảo sát tổng lượng acid, HCA, citric acid trong 06
mẫu vỏ quả bứa theo ñộ tuổi từ xanh non ñến chín (03 – 09 tuần
tuổi).
- Trong các mẫu ñã phân loại từ non ñến già, mẫu quả bứa ñạt 8
tuần tuổi (quả chín) có tổng lượng acid lớn nhất (17,159%).
- Lượng HCA thu ñược trong 6 mẫu tăng dần theo ñộ tuổi, trong
ñó thu ñược nhiều nhất ở 8 tuần tuổi (15,22%). Lượng citric acid thu
ñược trong 6 mẫu tăng dần rồi giảm, trong ñó thu ñược nhiều nhất ở
5 tuần tuổi (0,74%).
- Từ kết quả khảo sát cho thấy tổng lượng acid tăng tỷ lệ thuận
theo thời gian, lượng citric acid trong vỏ quả bứa tuần thứ 3 ñến tuần
thứ 5 thì tăng sau ñó tuần thứ 6, 7, 8 thì giảm, còn lượng HCA thì
tăng theo thời gian như tổng lượng acid.
- Từ kết quả khảo sát trên, có thể khẳng ñịnh thời ñiểm thu
hoạch quả bứa ñể làm nguyên liệu tốt nhất là lúc bứa chín (8 tuần
tuổi).
3.1.5. Kết luận 1
1. Tên khoa học của cây bứa tại xã Hòa Liên, huyện Hòa Vang,
TP. Đà Nẵng là Garcinia oblongifolia Champ. Ex Benth. thuộc họ
Clusiaceae (Guttiferae) - Bứa.
2. Thời ñiểm thu hoạch vỏ quả bứa ñể thu nhận lượng acid hữu
cơ nói chung và HCA nói riêng lớn nhất là lúc bứa chín, khoảng 8
tuần tuổi.
3. Hàm l
ượng các kim loại nặng trong lá và vỏ quả bứa vùng
nguyên liệu thấp, ñảm bảo tiêu chuẩn sử dụng làm thực phẩm.
3.2. NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH ACID HỮU CƠ TỪ LÁ, VỎ QUẢ BỨA



13

3.2.1. Sơ ñồ quy trình chiết tách acid hữu cơ từ lá, vỏ quả bứa
3.2.2. Xác ñịnh tổng lượng acid hữu cơ bằng phương pháp chuẩn
ñộ acid-bazơ
- Tổng acid trong mẫu vỏ quả bứa khô chiết trong nước là cao
nhất (18,59%), acid tan tốt nhất trong nước, kế ñến là axeton
(13,73%), metanol (10,49%). So sánh với kết quả của các loài ñã
nghiên cứu như Garcina cambogia (17-19,2%), Garcina india
(12,48-15,1%), Garcina cowa (27,1%), kết quả chiết trong nước của
vỏ quả bứa khô Việt Nam cho kết quả trung bình.
- Tổng lượng acid trong mẫu lá tươi chiết bằng nước là 3,54%.
So sánh với kết quả của các loài bứa ñã nghiên cứu như Garcina
india (5,88-6,99%), Garcina cowa (4,457%), kết quả chiết trong
nước của lá bứa tươi cho kết quả thấp.
- Vậy, tổng lượng acid chiết ñược từ vỏ quả bứa Việt Nam bằng
năng lượng vi sóng cho cao nhất, tiếp theo bằng nồi áp suất, chiết
soxhlet và cuối cùng là ngâm chiết.
3.2.3. Nghiên cứu ñiều kiện sắc kí và cách tiến hành xác ñịnh
HCA bằng máy sắc kí lỏng cao áp (HPLC)
3.2.3.1. Kết quả xây dựng ñường chuẩn
Đường chuẩn ñược xác ñịnh bằng cách thay ñổi nồng ñộ của 05
mẫu chuẩn, với nồng ñộ từ 10 ñến 320 ppm và phương trình ñường
chuẩn xác ñịnh ñược: C = 1,37A – 6,88 với A: diện tích pic của
HCA, C: nồng ñộ HCA, R
2
= 0,9997.
3.2.3.2. Kết quả xác ñịnh HCA trong dịch chiết vỏ quả bứa
Chiết bằng dung môi nước cho lượng HCA là lớn nhất, tiếp ñến
là axeton và metanol. Giá tr
ị thu ñược chủ yếu của phương pháp
HPLC ñược tính ñến chỉ là HCA, bởi vì giá trị thu ñược từ diện tích
pic của HCA lớn nhất. So sánh với các kết quả của các tác giả nước



14

ngoài thì hàm lượng HCA trong vỏ quả bứa là khá cao (15,170-
15,270%), Garcina cambogia (16-18%), Garcina india (10,27-
12,74%), Garcina cowa (10,209-12,695%). Kết quả trong lá bứa tươi
lượng HCA cho kết quả trung bình (2,853-2,878%) so với kết quả
của Garcina india (4,10-4,64%), Garcina cowa (1,672%) và không
tìm thấy lượng citric acid.
Điều kiện sắc ký ñể xác ñịnh HCA trên máy HPLC Merck
Hitachi D7000: cột sắc ký Lichrospher RP18 5µm x 4,6 mm x 250
mm; ñetectơ D7240 Autosampler D7200, pha ñộng là dung dịch acid
photphoric 0,1 % với tốc ñộ dòng 1,0 ml/phút. Acid chủ yếu ñược
tìm thấy trong lá, vỏ quả bứa bằng HPLC là HCA, ñược thể hiện trên
sắc ký ñồ tại phụ lục. Trên sắc ký ñồ, HCA cho pic ñơn trong tất cả
các mẫu chiết. Xác ñịnh pic HCA dựa vào pic của acid HCA chuẩn
xuất hiện ở thời gian lưu là 3,802 phút. Thời gian lưu của HCA ñược
tìm thấy trong tất cả các mẫu là 3,8 ± 0,14 phút.
3.2.4. Kết luận 2
Từ những kết quả nghiên cứu trên có thể nhận xét sau:
1. Đã xác ñịnh ñược tổng lượng acid hữu cơ và các acid hữu cơ
riêng biệt trong dịch chiết lá, vỏ quả bứa. HCA là acid hữu cơ chủ
yếu ñược tìm thấy trong dịch chiết trong lá, vỏ quả bứa. Lượng HCA
xác ñịnh ñược từ vỏ quả bứa Việt Nam là khá cao (15,17-15,27%),
cao hơn 02 loài bứa của Ấn Độ là G. indica và G. cowa.
2. Thay ñổi các dung môi và các phương pháp chiết khác nhau,
dung môi nước cho lượng HCA là cao nhất (15,28%), kế tiếp là
axeton (12,99%), metanol (9,50%). Phương pháp chiết bằng năng
l
ượng vi sóng với dung môi nước cho lượng HCA cao nhất
(15,28%).



15

3.3. NGHÊN CỨU CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG QUY TRÌNH
CHIẾT ACID HỮU CƠ TỪ LÁ, VỎ QUẢ BỨA
3.3.1. Chiết tách bằng năng lượng vi sóng
Kết quả khảo sát quá trình chiết tách theo thời gian, cấp ñộ máy
và tỷ lệ rắn lỏng cho thấy: thời gian chiết xuất hiệu quả nhất là 25
phút; cấp ñộ máy thích hợp là cấp 2 (400W); tỷ lệ rắn lỏng thích hợp
là khoảng 10 g chất rắn trên 150 ml dung môi. Tổng lượng acid và (-
)- HCA chiết ñược cao nhất trong ñiều kiện trên lần lượt là 18,59%
và 15,28%.
3.3.2. Chiết tách bằng bộ chiết soxhlet với dung môi axeton và metanol
Chiết trong dung môi axeton cho kết quả tốt hơn chiết trong
dung môi metanol. Khi tăng thời gian chiết thì tổng lượng acid tăng
lên và với thời gian chiết ñạt 8 giờ cho kết quả cao nhất, nếu tiếp tục
tăng thời gian chiết thì lượng acid tăng không ñáng kể, hoặc không
tăng. Tổng lượng acid thu ñược khi sử dụng dung môi axeton
(13,71%), dung môi metanol (10,40%), với thời gian chiết là 8 giờ.
3.3.3. Chiết tách bằng nồi áp suất với dung môi nước
3.3.3.1. Kết quả chiết xuất acid trong lá bứa:
Với phương pháp chưng ninh lá bứa tươi trong nồi áp suất bằng
dung môi nước cho kết quả tốt khi thời gian chiết là 1 giờ và thể tích
dung môi chiết là 150 ml, tổng lượng acid thu ñược (2,258%).
3.3.3.2. Kết quả chiết xuất acid trong vỏ quả bứa khô:
Với phương pháp chưng ninh trong nồi áp suất ở ñiều kiện
0,15MPa và nhiệt ñộ 127
0
C, thời gian chiết tối ưu là 90 phút và tỉ lệ
rắn/lỏng tối ưu là 10g/200ml nước, tổng lượng acid (17,16%).
3.3.4. K
ết luận 3
1. Khảo sát 03 phương pháp chiết tách, kết quả phương pháp
chiết sử dụng năng lượng vi sóng với thời gian chiết ngắn (25 phút)



16

nhưng cho kết quả HCA cao nhất (15,28%). Do thời gian chiết ngắn
nên phương pháp này tiết kiệm năng lượng, ñây là ưu ñiểm nổi bật
của phương pháp mới này so với các phương pháp mà các tác giả
nước ngoài ñã công bố.
2. Điều kiện tối ưu ñể chiết HCA lớn nhất bằng năng lượng vi
sóng là: thời gian chiết 25 phút, tỷ lệ rắn lỏng 150ml nước/10gam vỏ
quả bứa khô, công suất lò vi sóng 400W. Tổng lượng acid hữu cơ
chiết ñược là 18,59%, HCA là 15,28%.
3. Trong phương pháp chiết bằng chưng ninh trong nồi áp suất
các yếu tố về thời gian chiết, tỷ lệ rắn lỏng ñều ảnh hưởng ñến hiệu
suất chiết tổng lượng acid.
4. Với thời gian chiết là 8 giờ, chiết với dung môi metanol lượng
acid chiết ñược 10,49%, chiết với dung môi axeton lượng acid chiết
ñược 13,71%.
3.4. NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH CHUYỂN HOÁ TẠO MUỐI
CỦA HCA
3.4.1. Tạo muối kali của HCA
3.4.1.1. Khảo sát ảnh hưởng của lượng KOH 40% ñến quá trình
chuyển hoá tạo muối kali của HCA
Điều kiện chuyển hóa tạo muối kali cho sản phẩm có thể sấy khô
là sử dụng 7,0–10,0ml KOH ñậm ñặc (40%)/dịch chiết 100g vỏ quả
bứa, hàm lượng HCK trong muối ñiều chế xác ñịnh bằng HPLC là
77,021%.
3.4.1.2. Tinh chế muối HCK
Rửa tinh chế muối HCK thô bằng cách: tăng tỷ lệ cồn từ 60% ÷
100% và n
ước giảm 40% ÷ 0%. Hàm lượng HCK trong muối sau
tinh chế xác ñịnh bằng HPLC là 99,221% (các kết quả kiểm tra chất
lượng, cấu trúc HCK sau tinh chế thể hiện mục 3.5).



17

3.4.1.3. Hiệu suất tạo muối HCK
Khối lượng muối HCK ở dạng rắn tinh thể tạo thành trung bình là
13,523g/100g mẫu, hiệu suất tạo muối 85,06 – 87,02%.
3.4.2. Tạo muối canxi của HCA
3.4.2.1. Khảo sát ảnh hưởng của pH ñến quá trình chuyển hoá tạo
muối canxi của HCA
Dịch chiết sau khi làm sạch ñược trung hoà acid bằng cách cho
thêm dung dịch CaCl
2
. Dung dịch thu ñược khuấy trộn khoảng 30–120
phút. Khi thêm CaCl
2
vào, lúc ñầu xuất hiện ít kết tủa trắng, sau xuất
hiện ngày càng dày ñặc tạo thành bùn, pH của hỗn hợp bùn thích hợp từ
9,5 ñến 11. Sử dụng dung dịch NaOH ñể chỉnh ñộ pH. Phần kết tủa
không tan là muối HCCa, phần muối này ñược sấy khô trong tủ sấy
trong thời gian 24 giờ, muối HCCa có màu trắng xám.
3.4.2.2. Hiệu suất tạo muối
Khối lượng muối HCCa ở dạng rắn tạo thành trung bình là
11,207 g/100g mẫu, hiệu suất tạo muối 83,97 – 88,83%.
3.4.3. Kết luận 3
1. Đã xác ñịnh ñược ñiều kiện và quy trình tạo muối HCK,
HCCa. Điều kiện thích hợp tạo muối HCK là 7,0 – 10,0ml KOH ñậm
ñặc (40%)/ dịch chiết từ 100g vỏ quả bứa khô và ñiều kiện thích hợp
tạo muối HCCa là pH từ 9,5-11, pH ñược ñiều chỉnh bởi dung dịch
NaOH 10%.
2. Hệ dung môi thích hợp ñể tinh chế muối HCK là hỗn hợp
cồn/nước, nồng ñộ cồn tăng từ 60% ñến cồn tuyệt ñối.
3. Khối lượng muối HCK ở dạng rắn tinh thể tạo thành ổn ñịnh
trung bình là 13,523g/100g m
ẫu, hiệu suất tạo muối 85,06 – 87,02%.
Khối lượng muối HCCa ở dạng rắn tạo thành ổn ñịnh trung bình là



18

11,207 g/100g mẫu, hiệu suất tạo muối 83,97 – 88,83%.
3.5. KIỂM TRA CẤU TRÚC, ĐỘ TINH KHIẾT, HÀM LƯƠNG
KIM LOẠI NẶNG VÀ VI SINH VẬT CỦA CHẾ PHẨM MUỐI
HCCa, HCK
3.5.1. Kiểm tra sản phẩm muối HCK, HCCa bằng HPLC
1. Muối HCK
Kết quả chạy HPLC của muối HCK tạo thành ta thu ñược 04 pic
với thời gian lưu khác nhau (hình 3.18a), pic có thời gian lưu gần với
thời gian lưu của HCA chuẩn cường ñộ lớn nhất, xuất hiện pic có
thời gian lưu là 3,70 phút gần với thời gian lưu của HCA chuẩn là
3,77 phút và có diện tích lớn nhất chiếm 77,021%. Tuy nhiên, muối
HCK này còn lẫn nhiều tạp chất thể hiện ở 03 pic còn lại ứng với
thời gian lưu là 2,25; 2,82 và 7,11. Ta tiến hành tinh chế muối HCK
bằng cách rửa với hỗn hợp cồn nước với các tỷ lệ khác nhau. Kết quả
các tạp chất giảm, pic có thời gian lưu 7,11 biến mất chỉ còn 02 pic
tạp chất có diện tích rất nhỏ là pic có thời gian lưu 2,33 và 2,82 (hình
3.18b). Pic thể hiện HCK có diện tích tăng và ñạt ñộ tinh khiết
99,221%. Hàm lượng muối HCK tạo ñược có ñộ tinh khiết cao so
với kết quả công bố của Majeed và các cộng sự (92,840%), thời gian
l
ưu trùng khớp nhau (3,722phút).
2. Muối HCCa

Hình 3.18. Sắc kí ñồ HPLC của sản phẩm muối HCK trước (a) và sau tinh chế (b)

a b



19

Kết quả chạy HPLC của muối HCCa tạo thành ta thu ñược 03
pic với thời gian lưu khác nhau (hình 3.19a), pic có thời gian lưu gần
với thời gian lưu của HCA chuẩn (xuất hiện pic có thời gian lưu là
3,73 phút gần với thời gian lưu của HCA chuẩn là 3,77 phút) cường
ñộ lớn nhất và có diện tích lớn nhất chiếm 51,187%. Tuy nhiên, muối
HCCa này còn lẫn nhiều tạp chất thể hiện ở 02 pic còn lại ứng với
thời gian lưu là 2,23 và 2,78. Ta tiến hành tinh chế muối HCCa bằng
cách rửa nhiều lần với nước cất. Kết quả các tạp chất giảm, các pic
tạp chất có diện tích rất nhỏ là pic có thời gian lưu 2,19 và 2,79 (hình
3.19b). Pic thể hiện HCCa có diện tích tăng và ñạt ñộ tinh khiết
97,077%.

3.5.2. Kiểm tra sản phẩm muối HCK, HCCa bằng phổ IR
Kết quả kiểm tra phổ IR của muối HCK, HCCa và HCCa chuẩn
về hình dáng tương tự nhau (phổ IR của muối HCCa và HCCa chuẩn
ñộ trùng lặp 98,69%). Như vậy, có thể sơ bộ kết luận những muối
ñược tạo thành có cấu trúc tương tự với HCCa chuẩn.
Bảng 3.25: Kết quả chụp phổ IR của muối HCK, HCCa
Pic ñặc trưng
Muối HCCa
chuẩn
Muối HCK Muối HCCa
Phổ dao ñộng nhóm -OH 3400,11 cm
-1
3376,22 cm
-1
3310 cm
-1

Phổ dao ñộng nhóm -C=O 1599,04 cm
-1
1592,53 cm
-1
1582 cm
-1


Hình 3.19. Sắc kí ñồ HPLC của sản phẩm muối HCCa trước (a) và sau tinh chế (b)

a

b




20

3.5.4. Kiểm tra cấu trúc muối HCCa, HCK bằng phổ cộng hưởng
từ hạt nhân
1. Muối HCCa
Phổ
13
C-NMR của muối HCCa
chuẩn và HCCa ñiều chế ñược thể hiện
ở hình 3.21a, 3.21b. Phổ
13
C-NMR của
HCCa chuẩn ở hình 3.22a trên có 03 pic tại 39,920; 74,925; 77,716
kết quả tương ứng của methylene cacbon (C-5, 5’), methine cacbon
(C-1, 1’) và cacbon bậc 4 (C-3, 3’). Các pic tại 162,862; 163,158;
174,158 là của cacbonyl cacbon (C-2, 2’; C-4, 4’ và C-6, 6’) của 03
nhóm cacboxylat trong muối HCCa chuẩn. Đối với phổ
13
C-NMR
của HCCa ñiều chế ở hình 3.21b trên có các pic tương tự phổ
13
C-
NMR của HCCa chuẩn, cụ thể có 03 pic tại 39,921; 75,048; 77,607
kết quả tương ứng của methylene cacbon (C-5, 5’), methine cacbon
(C-1, 1’) và cacbon bậc 4 (C-3, 3’). Ở phổ
13
C-NMR của HCCa ñiều
chế chỉ xuất hiện 01 pic tại 162,527 là của cacbonyl cacbon (C-2, 2’;
C-4, 4’ và C-6, 6’). Điều này có thể giải thích do ñộ phân giải của
máy và nồng ñộ của HCCa ñiều chế cao nên các pic 163,158 bị trùng
với pic 162,527; và pic 174,158 có vùng nhô lên nhưng máy không
báo kết quả.
Phổ
1
H-NMR của muối HCCa chuẩn và HCCa ñiều chế ñược thể
hi
ện ở hình 3.22a, 3.22b.
Tín hiệu phổ
1
H-NMR của proton methylen
(Ha-5, 5’ và Hb-5, 5’) xuất hiện ở 2,95 và 3,02. Pic singlet tại 4,3 thể hiện
proton của nhóm methine (H-1 và H-1’). Phổ
1
H-NMR của HCCa ñiều chế
b
C
H
HO
HO
C
C
COO
COO
COO
Hb
OOC
Ca
Ca
C
H
HO
HO
C
C
Ha
COO
COO
Hb
Ca
1'
2'
3'
5'
6'
4'
1
2
3
5
6
4
Ha

Hình 3.20. Cấu trúc muối HCCa



Hình 3.21. Ph

13
C
-
NMR c
ủa muối HCCa

a
b



21

tại 02 pic 2,9 và 3,0 là pic siglet tù.


Hình 3.22. Phổ
1
H-NMR của muối HCCa
Từ kết quả kiểm tra phổ
13
C-NMR và
1
H-
NMR cho thấy sản phẩm muối HCCa ñiều chế
có công thức cấu tạo phù hợp với công thức
muối chuẩn tại hình 3.20.
2. Muối HCK
Phổ
13
C-NMR của muối HCK ở hình 3.24 trên có 03 pic tại
42,249; 76,416; 78,859 kết quả tương ứng của methylene cacbon (C-
5), methine cacbon (C-1) và cacbon bậc 4 (C-3) trong muối HCK.
Các pic tại 177,951; 180,073 là của cacbonyl cacbon (C-2; C-4 và C-
6) của 03 nhóm cacboxylat trong muối HCK.
Phổ
1
H-NMR của muối HCK ñược thể hiện ở hình 3.25. Tín hiệu
ph

1
H-NMR của proton methylen (Ha-5, Hb-5) xuất hiện ở 2,698 và
2,794. Pic singlet tại 4,699 thể hiện proton của nhóm methine (H-1).
Từ kết quả kiểm tra phổ
13
C-NMR và
1
H-NMR cho thấy sản
a b
C
HHO
HO
C
C
H
a
COOK
COOK
COOK
H
b
1
2
3
5
6
4

Hình 3.23. Cấu trúc muối HCK


Hình 3.24. Phổ
13
C-NMR của muối HCK Hình 3.25. Phổ
1
H-NMR của muối HCK




22

phẩm muối HCK ñiều chế có công thức cấu tạo phù hợp với công
thức muối kali như dự ñoán ban ñầu hình 3.23.
3.5.4. Kiểm tra cấu trúc muối HCCa, HCK bằng phổ khối lượng
Kết quả phổ khối lượng của muối HCCa chuẩn, HCCa và HCK
ñiều chế phân mảnh rất phức tạp chưa thể giải thích ñược. Tuy nhiên,
theo nguyên tắt chụp bàn tay ta thấy phổ khối lượng của muối HCCa
chuẩn và HCCa ñiều chế hoàn toàn giống nhau. Một số mảnh cơ bản
của muối HCK ñiều chế cũng giống với muối HCCa chuẩn.
3.5.5. Kiểm tra hàm lượng kali, canxi và các kim loại nặng trong
sản phẩm muối HCK, HCCa.
Kết quả kiểm tra thành phần kim loại nặng trong sản phẩm muối
HCK, HCCa ñạt tiêu chuẩn về lương thực, thực phẩm của Việt Nam.
Vì vậy, có thể ứng dụng sản phẩm HCK, HCCa ñược tạo thành ñể
làm thực phẩm.
Hàm lượng kali trong sản phẩm HCK là thành phần kim loại
chính, 320.000 mg/kg (chiếm 32%). Hàm lượng canxi trong sản
phẩm HCCa là thành phần kim loại chính, 201.000 mg/kg (tương
ñương 20,1%).
- Kết quả kiểm tra hàm lượng canxi trong muối HCCa ñiều chế
(20,1%) phù hợp với hàm lượng canxi trong muối chuẩn (19,5%),
phù hợp với công thức phân tử hình 3.20. Kết quả hàm lượng canxi
(20,1%) cao hơn so với kết quả công bố của Bhasharan và các cộng
sự (17,22%).
- Kết quả kiểm tra hàm lượng kali trong muối HCK ñiều chế
(32%) phù hợp với hàm lượng kali trong tính toán theo lý thiết dựa
vào công thức (117,295/322,394 ≈ 36,29%) hình 3.23. Ngoài ra, so
sánh với kết quả công bố của Majeed và cộng sự thì hàm lượng kali
trong mu
ối tạo thành phải không nhỏ hơn 30% khối lượng khan, vậy
kết quả hàm lượng kali (32%) hoàn toàn phù hợp.



23

3.5.6. Kiểm tra chỉ tiêu vi sinh vật các muối HCK và HCCa ñiều chế
Kết quả phân tích các chỉ tiêu vi sinh (tổng vi khuẩn hiếu khí, E.
coli, tổng bào tử nấm men - mốc) cho thấy các mẫu muối HCK,
HCCa thỏa mãn Tiêu chuẩn vi sinh cho phép trong thực phẩm của
Bộ Y tế. Do ñó, có thể ứng dụng sản phẩm HCK, HCCa ñược tạo
thành ñể làm thực phẩm.
3.5.7. Kiểm tra ñộ quay cực các muối HCK và HCCa
Độ quay cực của muối HCK trung bình (- 21,47
o
), kết quả này
phù hợp với công bố của Majeed và các cộng sự (-18
o
÷-25
o
)

và của muối HCCa (- 19,94
o
).
3.5.8. Kết luận 4
1. Chế phẩm chuyển hóa tạo muối kali của HCA là kali (-)-
hydroxycitrate. Chế phẩm chuyển hóa tạo muối Canxi của HCA là
canxi (-)-hydroxycitrate. Các muối tạo thành hoàn toàn tương thích
với l í thuyết.
2. Hàm lượng kim loại nặng và vi sinh vật trong các chế phẩm
HCK và HCCa ñảm bảo ñạt tiêu chuẩn Việt Nam và thế giới ñối với
thực phẩm.
3. Chế phẩm HCK và HCCa có ñộ tinh khiết cao có thể sử dụng
ñể làm thực phẩm chức năng như là chất chống béo phì.
3.6. NGHIÊN CỨU MỘT SỐ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA SẢN
PHẨM MUỐI HCCa VÀ HCK TRÊN CHUỘT
3.6.1. Độc tính cấp:
LD
50
của HCK là 8,717g/kg thể trọng chuột. Với liều 23g
HCCa/kg thể trọng chuột không xác ñịnh ñược LD
50
, HCCa có ñộ an
toàn cao.
3.6.2. Tác dụng hạ lipid
+ HCK li
ều 700 mg/kg thể trọng chuột có tác dụng ức chế sự
tăng cholesterol toàn phần và triglycerid gây bởi Triton WR 1339
trên chuột nhắt trắng.



24

+ HCCa cho chuột uống với liều 700 mg và 1500 mg/kg thể
trọng chuột ñã không có tác dụng ức chế sự tăng cholesterol toàn
phần và triglycerid gây bởi Triton WR 1339 trên chuột nhắt trắng.
3.6.3. Tác dụng tăng lực:
+ HCK liều 700 mg/kg thể trọng chuột, uống 2 và 4 ngày liên
tục, có tác dụng làm tăng thời gian bơi của chuột lần lượt là 36,9% (P
> 0,05) và 70,4% (P < 0,05) trên mô hình chuột bơi cưỡng bức.
+ HCCa liều 1500 mg/kg thể trọng chuột, uống 2 và 4 ngày liên
tục, có tác dụng làm tăng thời gian bơi của chuột lần lượt là 19,0% (P
> 0,05) và 39,3% (P > 0,05) trên mô hình chuột bơi cưỡng bức.
3.6.4. Tác dụng chống béo phì
- HCK liều 700 mg/kg thể trọng chuột, uống trong 8 tuần có tác
dụng làm giảm trọng lượng cơ thể và trọng lượng mô mỡ của chuột
ñược gây béo phì trong 10 tuần một cách có ý nghĩa thống kê. Tuy
nhiên, HCK không có tác dụng làm giảm trọng lượng gan của những
chuột này.
- HCCa liều 1500 mg/kg thể trọng chuột, uống trong 8 tuần làm
giảm trọng lượng cơ thể 5,26% (P>0,05), giảm trọng lượng gan 2,6%
(P>0,05) và mô mỡ 4,49% (P>0,05) của chuột ñược gây béo phì
trong 10 tuần.
- Cả 2 lô uống HCK (700 mg/kg) và HCCa (1500mg/kg) không
có tác dụng làm giảm hàm lượng cholesterol toàn phần và triglycerid
huyết thanh của chuột ñược gây béo phì trong 10 tuần.
c. Hàm lượng cholesterol, triglycerid của chuột sau 10 tuần thí
nghiệm
- Cả 2 lô chuột gây béo phì uống HCK (700 mg/kg) và HCCa
(1500mg/kg) không có tác dụng làm giảm hàm lượng cholesterol
toàn ph
ần và triglycerid huyết thanh của chuột ñược gây béo phì
trong 8 tuần uống thuốc.




25

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ

A. KẾT LUẬN
1. Đã ñịnh danh ñược tên khoa học của cây bứa tại xã Hòa Liên,
huyện Hòa Vang, thành phố Đà Nẵng là Garcinia oblongifolia
Champ. Ex Benth. thuộc họ Clusiaceae (Guttiferae) - Bứa. Đã xác
ñịnh thời ñiểm thích hợp ñể thu hái quả bứa là 8 tuần tuổi (khi quả
bứa chín). Xác ñịnh ñược thành phần trong lá, vỏ quả bứa, cụ thể: Độ
ẩm trong lá (70,90%) và vỏ quả bứa tươi (84,34%); Hàm lượng tro
trong lá (3,44%) và vỏ quả bứa sấy khô (1,42%); Các kim loại nặng
trong lá, vỏ quả bứa nằm trong giới hạn cho phép của tiêu chuẩn thực
phẩm của Việt Nam và quốc tế.
2. Đã nghiên cứu chiết tách HCA bằng các phương pháp khác
nhau và kết luận ñược chiết bằng sự hỗ trợ năng lượng vi sóng cho
hiệu quả cao nhất (15,28%).
3. Đã xác ñịnh ñược tổng lượng acid hữu cơ và các acid hữu cơ
riêng biệt trong dịch chiết lá, vỏ quả bứa. Bằng phương pháp sắc ký
lỏng cao áp ñã xác ñịnh ñược (-)-hydroxycitric acid là thành phần
acid chủ yếu có trong lá, vỏ quả bứa, hàm lượng HCA tìm thấy trong
lá (2,86%), vỏ quả bứa khô (15,28%). Lượng HCA xác ñịnh ñược từ
vỏ quả bứa Việt Nam là khá cao (15,28%), cao hơn 02 loài bứa của
Ấn Độ là G. indica và G. cowa.
4. Đã xây dựng quy trình chuyển hoá tạo muối kali và canxi của
hydroxycitric acid. Kiểm tra sản phẩm sau chuyển hoá phù hợp với
lý thuyết, sản phẩm thu nhận là muối canxi (-)-hydroxycitrate và kali
(-)-hydroxycitrate có ñộ tinh khiết cao: HCCa (97,077%) và HCK
(99,221%), các chỉ tiêu về hàm lượng kim loại, vi sinh vật ñảm bảo
ñạt tiêu chuẩn Việt Nam và quốc tế về thực phẩm.
5. Chế phẩm HCK có LD
50
(8,717g/kg), ngược lại HCCa không